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液相色譜柱的一些基礎知識使用介紹分析
發布時間:2018-02-05   點擊次數:974次
   液相色譜柱在使用前,zui好進行柱的性能測試,並將結果保存起來,作為今後評價柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由於所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是zui佳條件),隻有這樣,測得的結果才有可比性。
  液相色譜柱可以分為許多種:正相色譜柱,反相色譜柱,離子交換柱,液相色譜柱廠家許多,不一樣的液相色譜柱也會有不一樣的類型。每個廠家有每個廠家的叫法。有的叫液相色譜柱,有的叫色譜柱,有的叫碳十八烷基矽烷化學建合柱。
  液相色譜柱可以分為:正相色譜柱,反向色譜柱,凝膠色譜柱,Hilic色譜柱,離子色譜柱,疏水色譜柱,親和色譜柱,超高效液相色譜柱,手性色譜柱。
  液相色譜柱還有專用色譜柱:如麻黃專用色譜柱,蜂蜜專用色譜柱,利巴韋林專用色譜柱,甘露醇專用色譜柱,乳糖專用色譜柱,肝素鈉專用色譜柱,氨基酸專用色譜柱,益母草專用色譜柱,硫酸軟骨素納專用色譜柱。頭孢聚合物專用色譜柱。抗體剖析專用色譜柱。
  1、樣品的前處理:
  a、zui好使用流動相溶解樣品。
  b、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產生不可逆吸附的雜質。
  c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質。
  2、流動相的配製:
  液相色譜柱是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:
  a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉澱在柱中(或長時間保留在柱中)。
  b、流動相具有一定惰性,與樣品不產生化學反應(特殊情況除外)。
  c、流動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
  d、流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器,zui好使用對紫外吸收較低的溶劑配製。
  e、流動相沸點不要太低,否則容易產生氣泡,導致實驗無法進行。
  f、在流動相配製好後,一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利於檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發生作用。
  液相色譜柱也已經商品化。由於其特殊的性質,一般僅限於特殊的用途。如,石墨化碳正逐漸成為反相色譜柱填料。這種填料的分離不同於矽膠基質烷基鍵合相,石墨化碳的表麵即是保留的基礎,不再需其它的表麵改性。該柱填料一般比烷基鍵合矽膠或多孔聚合物填料的保留能力更強。石墨化碳可用於分離某些幾何異構體,又由於在HPLC流動相中不會被溶解, 這類柱可在任何pH與溫度下使用。
  氧化鋁
  也可用於HPLC,氧化鋁微粒剛性強,可製成穩定的色譜柱柱床,其優點是可在pH高達12的流動相中使用。但由於氧化鋁與堿性化合物作用也很強,應用範圍受到一定的限製,所以未能廣泛應用。新型氧化鋯基質色譜填料也可用於HPLC,商品化的僅有聚合物塗層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應用pH範圍1~14,溫度可達100℃。由於氧化鋯填料是zui近幾年才開始研究,加之麵臨的實驗難度,其重要用途與優勢尚在進行中。
  當然和液相色譜柱的原理一樣,液相色譜的柱長度,柱內徑對分離效果也有重要的影響.
  您現在就可以看到其實液相色譜柱的分離效果主要取決於其色譜填料,柱長度,柱內徑這幾個因素,從原理上講,這幾個因素相同的柱子,其分離效果是完全一樣的.
  考慮到這一點,現在您完全根據這個更加本質的依據來現在您的液相色譜柱,而不必一定去現在昂貴的標準指定液相色譜柱.
  流動相流速的選擇:
  液相色譜柱是柱中流動相線性流速的函數,使用不同的流速可得到不同的柱效。對於一根特定的色譜柱,要追求zui佳柱效,zui好使用zui佳流速。對內徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對於內徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。

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