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熒光分光光度計的原理和優缺點介紹
發布時間:2017-07-31   點擊次數:536次

熒光分光光度計是用於掃描液相熒光標記物所發出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發光譜、發射光譜以及熒光強度、量子產率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數,從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。

 

熒光分光光度計的基本原理:

 

由高壓汞燈或氙燈發出的紫外光和藍紫光經濾光片照射到樣品池中,激發樣品中的熒光物質發出熒光,熒光經過濾過和反射後,被光電倍增管所接受,然後以圖或數字的形式顯示出來。 物質熒光的產生是由在通常狀況下處於基態的物質分子 吸收激發光後變為激發態, 這些處於激發態的分子是不穩定的,在返回基態的過程中將一部分的能量又以光的形式放出,從而產生熒光。

不同物質由於分子 結構的不同,其激發態能級的分布具有各自不同的特征,這種特征反映在熒光上表現為各種物質都有其特征熒光激發和發射光譜;,因此可以用熒光激發和發射光譜的不同來定性地進行物質的鑒定。

 

熒光分光光度計的優缺點:

 

優點:靈敏度高,可以用於掃描液相熒光標記物所發出的熒光光譜,不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環境下的構象變化, 從而闡明分子結構與功能之間的關係。

缺點:

1、熒光的光強並不高,所以呈線性情況有時不很理想;

2、某些反應熒光持續的時間較短;

3、熒光的發散方向不集中,不像透射光那樣集中,強度高;

4、受某些離子的幹擾影響,熒光會湮滅,試驗速度必須要快。

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