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TSK-Gel凝膠色譜柱清洗方法
發布時間:2017-06-15   點擊次數:490次

      親水性乙烯基樹脂基質蛋白分離用色譜柱,除了可選用鍵合了離子交換基團的離子交換柱外,還可選用疏水反應、親和等其他多種類型的柱子。
     這些類型的色譜柱,其充填介質化學穩定性好,不易發生由於官能基脫落而導致樣品組分洗脫位置變化的現象。盡管如此,由於柱子的反複使用,在長時間使用後,樣品組分的洗脫情況還是會發生改變的。其原因與樣品中極微量的附吸物在柱中的蓄積有關。特別由於生物樣品組分複雜,這種吸附現象時有發生。(非特異性吸附)當觀察到這樣的現象後,應使用合適的溶劑將蓄積的吸附物質去除,以恢複柱子的性能。

1、0.1-0.2mol/L NaOH水溶液(ABA-5PW柱不適用)
測定狀態下,用0.1-0.2mol/L的NaOH水溶液通過樣品進樣閥清洗數次(3-5回)。
2、20-40% 醋酸水溶液
與上述NaOH水溶液的清洗方法相同。
3、在淋洗液中添加水溶性有機溶劑(疏水性吸附物質的去除)
在淋洗液中添加甲醇、乙腈等水溶性有機溶劑(濃度《20%)進行過柱清洗。(注意鹽的析出)
4、在淋洗液中添加尿素、中性界麵活性劑(難溶性蛋白的去除)
在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或0.2-0.3%的中性界麵活性劑(Triton、Tween、Brij等)後進行過柱清洗。但需注意尿素及界麵活性劑的柱中殘留。

     通常情況下,使用方法1和2便可將吸附物質去除。如果方法1和2不能恢複柱效,則可使用方法3和4。注意,在附吸成分其吸附力極強時,即使進行過清洗,柱性能也有可能得不到恢複。

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